Search results for "proteīnu attīrīšana"
showing 7 items of 7 documents
Penicillium lanoso-viride AMP dezamināzes attīrīšana, izmantojot kolonnu hromatogrāfiju
2016
Darba mērķis bija iegūt pēc iespējas attīrītākas AMP dezamināzes frakcijas no mikroskopiskās sēnes Penicillium lanoso-viride glikoproteīnu preparātiem, izmantojot kolonnu hromatogrāfijas metodes, un raksturot iegūtās frakcijas. Mērķa sasniegšanai tika veikta hromatogrāfija DEAE celulozes un AMP sefarozes hromatogrāfijas kolonnās, kā arī attīrīšana, inkubējot proteīnu preparātus mēģenēs, kas pildītas ar DEAE celulozi. Pēc attīrīšanas ar DEAE celulozes hromatogrāfijas kolonnu tika iegūta aptuveni 3.7 reizes attīrītāka AMP dezamināzes frakcija, bet ar AMP sefarozes hromatogrāfijas metodi izdevās iegūt AMP dezamināzi ar attīrīšanas pakāpi 2.37 reizes. Ar DEAE celulozi pildītās mēģenēs AMP dezam…
Penicillium lanoso-viride AMP dezamināzes attīrīšanas preparatīvo metožu izstrāde
2015
AMP dezamināze ir glikoproteīns, kam piemīt imūnmodulējošas īpašības, tādēļ darba mērķis bija izstrādāt efektīvu un ātru AMPD attīrīšanas metodi no Penicillium lanoso–viride 8D, ar kuras palīdzību būtu iespējams iegūt proteīna preparātu ar pietiekami augstu AMPD aktivitāti. Izmantojot divfāžu frakcionēšanu ar PEG un amonija sulfātu, kam seko proteīnu precipitācija ar acetonu, tika atdalīts pigments un iegūts ekstrakts ar līdzīgu AMPD specifisko aktivitāti un lielāku aktivitātes iznākumu, kāds tiek iegūts, izmantojot proteīnu precipitāciju ar amonija sulfātu – līdz šim izmantoto metodi. AMPD attīrīšanai no koncentrētiem ekstraktiem tika izmantoti DEAE–Sephadex A–25, fosfoceluloze un konkanav…
Bakteriofāga Enc34 replikācijas moduļa proteīnu ekspresija, attīrīšana un raksturošana
2016
Darbā tika veikta bakteriofāga Enc34 replikācijas moduļa proteīnu sekvenču analīze un hipotētisko proteīnu ORF3, ORF4, ORF5 un ORF6 eksperimentāla izpēte ar mērķi identificēt to funkcijas. Pētījumu rezultātā praimāzei ORF1 tika atklāts iepriekš neidentificēts helikāzes domēns un ORF8 tika re-anotēts kā resolvāze. Rekombinanti producēts ORF4 bija nešķīstošs, savukārt ORF3 un ORF5 – šķīstoši, un to sekmīga attīrīšana ļauj darbu turpināt ar proteīnu kristalizāciju. ORF6 un delēcijas variantam ORF6Δ21 tika noteiktas kristālstruktūras, kuru analīze kopā ar in vitro eksperimentiem parādīja, ka ORF6 ir ssDNS saistošais proteīns (SSB). Pētījumā pirmoreiz tika atklāta SSB C-terminālā reģiona nozīme …
Modificētās L-ornitīna δ-aminotransferāzes strukturālie pētījumi jaunu diazonamīda A struktūranalogu dizainam
2015
Darba mērķi ir izstrādāt metodi rekombinantas modificētās ornitīna δ-aminotransferāzes (MOAT) produkcijai un kristalizēšanai, analizēt MOAT strukturālās atšķirības no ornitīna δ-aminotransferāzes (OAT), kā arī noteikt MOAT kristālu struktūru kompleksā ar Latvijas Organiskās sintēzes institūta pētnieku sintezētajiem diazonamīda A struktūranalogiem. Tādejādi, varētu noteikt MOAT un diazonamīda A struktūranalogu ķīmisko mijiedarbību veidu, iegūstot zināšanas jaunu MOAT inhibitoru dizainam. Bakalaura darba laikā tika iegūts rekombinants, E.coli producēts, MOAT, kā arī MOAT kristālstruktūra kompleksā ar piridoksāla 5´ fosfātu. Bakalaura darbs tika izstrādāts Latvijas Biomedicīnas pētījumu un stu…
Gripas vīrusa hemaglutinīna peptīdu attīrīšana, strukturālā izpēte un imunoloģiskās īpašības
2017
Gripas vīrusa mažorais virsmas antigēns hemaglutinīns (HA) ir primārais vīrusa neitralizējošo antivielu mērķis. HA stiebrs jeb stalks ir strukturāli konservatīvs proteīna domēns, kas šobrīd raisa plašu interesi kā potenciāls universālas gripas vakcīnas kandidāts. Darba ietvaros tika analizēti divu HA apakštipu (H1 un H3) stalka peptīdi, kas savstarpēji pārklājas C galā, – 57 aminoskābju garais peptīds 1 un N-galā pagarinātais 72 aminoskābju garais peptīds 2. Darbā tika veikta stalka peptīdu ekspresija, attīrīšana un kristalizācija. Analizējot H1 peptīda 1 kristālstruktūru, tika noteikts, ka apstākļos pie pH 6,7 tas ir trimērs, kura konformācija atbilst pilna garuma HA post-fusion struktūrai…
Borrelia burgdorferi celma B31 virsmas proteīna BBA68 struktūras noteikšana un analīze
2015
Borrelia burgdorferi ir spirohetu dzimtas baktērija, kura izraisa Laima slimību. Lai izvairītos no saimniekorganisma imūnajām reakcijām, B. burgdorferi ir izveidojies komplicēts gēnu regulācijas mehānisms, kur liela nozīme ir ārējās virsmas proteīniem. Darba mērķis bija ar rentgenstruktūranalīzes palīdzību noteikt B. burgdorferi celma B31 ārējā virsmas proteīna BBA68 trīsdimensiālo struktūru, un analizēt strukturālās atšķirības no B. burgdorferi celma ZS7 ārējā virsmas proteīna BbCRASP-1. Strukturālie pētījumi ļauj prognozēt proteīnu funkcijas, tādā veidā gūstot plašāku ieskatu par B. burgdorferi baktērijas mehānismiem Laima slimības patoģenēzē. Pētījumā sekmīgi tika iegūts proteīna BBA68 r…
Borrelia spielmanii ārējās virsmas proteīna BSE31 ekspresija un attīrīšana, kristalizācija un struktūras analīze
2018
Borrelia spielmanii ir ērču pārnēsāta spirohetu dzimtai piederoša baktērija, kas zināma kā Laima slimības ierosinātājs. Ērču barošanās laikā baktērijai nonākot zīdītāja organismā, daudziem tās proteīniem novēro ekspresijas pieaugumu. Viens no tādiem proteīniem ir B.burgdorferi B31 ārējās virsmas proteīns BBE31, kurš ir ļoti svarīgs Laima slimības patoģenēzē, jo bez šī proteīna borēlija nespēj izkļūt no ērces gremošanas sistēmas, lai tālāk nokļūtu jaunajā saimniekorganismā. Darba mērķis ir iegūt B. burgdorferi BBE31 homologo ārējās virsmas proteīnu BSE31 no B. spielmanii ekspresējot to Escherichia coli šūnās, kā arī veikt kristalizāciju un iegūt proteīna kristālstruktūru. Darba gaitā tika se…